来源：UJS医学检验毕业生
血涂片看似很基本，却是技术活。做好血液涂片和正确染色是血液细胞检验的重要步骤，涂片和染色效果的好坏直接关系着检验的结果，必须以认真负责的态度注意操作过程的每一个环节。没有制备/染色良好的血涂片，想正确识别血细胞无异于天方夜谭。
参考人民卫生出版社《临床检验基础》、《临床基础检验学技术》教材、中华人民共和国卫生行业标准(白细胞分类计数参考方法)（WS/T 246-2005），整理血涂片的制备/染色/观察方法，仅供战友学习参考。
一、载玻片的要求载玻片是用显微镜观察东西时用来放东西的玻璃片或石英片，呈长方形，大小为76*26 mm，较厚，透光性较好。使用时可将玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸20 分钟，再用自来水洗去肥皂和血膜等污物，最后再用蒸馏水冲洗3 ～5 次。必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烘干备用，彻底清洗游离碱质。
二、血涂片制备方法血涂片是血液细胞学检查的基本方法，应用极广。特别是对各种血液病的诊断有很大价值。但血片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。常规使用薄血膜退片法，可分为采血、制备血涂片、干燥三个步骤，如下所示：涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容有关。
值得一提的是取血量：左侧小血滴是5ul的，右侧大血滴是50ul的。不少资料都在这里犯了错误，比如全国临床检验操作规程第3版/第4版都说取0.05ml血（50ul），从上图不难看出，这么多血是不可能制备出良好血涂片的；推荐取5ul左右，最好是不抗凝的静脉血或者手指血；EDTA抗凝血也可用，但并不是最好的选择。
三、良好血涂片的标准由厚到薄均匀过渡，厚薄适宜，头/体/尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙，末端呈方形或羽毛状，无粒状/划线或裂隙（会使白细胞分布不均匀，集中在这些区域内）。血涂片外观应头、体、尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。
四、血涂片的染色（一）染料1、瑞氏染色法：①瑞氏染料由酸性染料伊红（E－）和碱性染料亚甲蓝（M＋）组成。②染色原理：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，可根据染色来判断细胞。2、吉姆萨染色法：染色原理与瑞氏染色法大致相同。吉姆萨染料由天青和伊红组成。本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差。3、瑞氏-吉姆萨复合染色法：兼顾两者之长，将瑞士染粉和吉氏染粉混合，用甲醇溶解即瑞-吉液，用瑞-吉液进行染色，使血细胞的颗粒及细胞核均能获得满意的染色效果。
（二）染色方法瑞氏/瑞吉染色方法：待血涂片干透后，用蜡笔在其两端划线，以防染色时染液外溢。具体如下所示：
五、血涂片染色良好的特征染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色， 染色质结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种异颜色。染色时间应视具体情况而定，特别是更换新染料时必须经试染，摸索最佳染色条件。六、血涂片检查步骤1、首先在低倍镜下（10倍～40倍）进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。然后，在100倍油镜下，观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。 2、检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。 3、中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。当白细胞总数正常时，在血涂片尾部和边缘，每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的2～3倍。 4、除某些病理情况（如慢性淋巴细胞白血病）外，破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细胞）应包括在分类计数中。在结果报告中，应设其他栏，以备填写破碎细胞或不能识别细胞，并作适当描述。 5、计数方法（1）采用“城垛式”方法检查血涂片（图1）。每个明确识别的细胞必须归入下列分类中：中性分叶核粒细胞；中性杆状核粒细胞；淋巴细胞；异型淋巴细胞；单核细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；其他有核细胞（除有核红细胞外）。能明确识别的破碎细胞，应恰当分类。【笔者注】实际工作中，有些同行习惯这样检查血涂片：这也是可以的。
（2）每张血涂片应计数200个白细胞，若样本中白细胞数量减少，应增加检查血涂片的数量。【笔者注】不过，一般的教科书的要求如下：所以，并不是一定要计数200个白细胞（3）白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。 （4）计数所有的有核红细胞，结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。
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