SOP文件 | 检验科微生物室革兰氏染色标准操作规程
1 目的
规范革兰氏染色标准操作规程。
2 原理
2.1 革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。
2.2 革兰阳性菌等电点（pH 2 ~ 3）比革兰阴性菌（pH 4 ~ 5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
2.3 革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；革兰阴性菌含核糖核酸镁盐很少，故易脱色。
3 试剂
3.1龙胆紫液
3.2 碘溶液
3.3 脱色液
3.4 沙黄溶液
4 质控
4.1 采用大肠埃希菌ATCC 25922质控标准菌株，每周1次，有室内质控记录。
4.2 采用金黄色葡萄球菌ATCC 25922质控标准菌株，每周1次，有室内质控记录。
5 操作步骤
5.1 初染：加龙胆紫液染色10秒，之后水洗，甩干。
5.2 媒染：加碘溶液染色10秒，之后水洗，甩干。
5.3 脱色：加脱色液脱色（10-20）秒，之后水洗，甩干。
5.4 复染：最后加沙黄溶液复染10秒，之后水洗。
5.5 待标本片自然干燥或用吸水纸吸干后，在涂菌处滴加1滴香柏油油镜观察。
6 结果判断
革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。
7 注意事项
7.1 染色时间须视何种标本、涂片厚薄等稍作调整；染妇科白带涂片时应稍延长染色时间（不少于10秒），可获得更好的染色效果。
7.2 试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
7.3 脱色液用完后，可用丙酮作为代用脱色液，脱色时间可稍短。
7.4 试剂贮存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
7.5 冬季室温过低时，染色时间要适当延长。
7.6 本试剂应由专业人员使用。
8 临床意义
8.1 鉴别细菌：可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。
8.2 选择药物：革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。
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